Главная » Грибы

Получение мицелия в домашних условиях

Сам себе миколог. У грибоводов, особенно начинающих, часто возникает вопрос: а можно ли получить мицелий в домашних условиях? В принципе, ничего невозможного в этом нет, хотя занятие не из самых легких, хлопотное и требует наличия определенных знаний, умения, а также оборудования и материалов.

Первый шаг на этом пути - заражение подходящей среды. Для приготовления сред используют экстракты и отвары питательных природных субстратов, а также целый ряд сложных искусственных сред различного состава. Как правило, все они готовятся с использованием агар-агара, так как такая среда имеет целый ряд преимуществ. Например, на поверхности агар-среды очень легко заметить загрязнения основной культуры посторонними микроорганизмами. В этом случае они могут быть своевременно удалены и не представлять помехи дальнейшему процессу.

Для приготовления среды может использоваться любой из следующих составов.

Сусло-агар: 200 мл неохмеленного пивного сусла разводят в 400 мл воды, 20 г агар-агара расплавляют в 400 мл воды, слегка охлаждают и смешивают с растворенным суслом.

Картофельно-глюкозный агар: 200 г очищенного и нарезанного картофеля кипятят в 500 мл воды не менее 2 часов, расплавляют 17 г агар-агара в 500 мл воды, отвар картофеля процеживают в агар и добавляют 20 г глюкозы.

Овсяный агар: 75 г овсяной муки медленно нагревают в течение часа в 500 мл воды на водяной бане, 17 г агар-агара расплавляют в 500 мл воды и смешивают с процеженным овсяным отваром.

Морковный агар: экстракт моркови - 400 мл, вода - 600 мл, агар - 15 г. Измельченная морковь смешивается с водой в соотношении 2:5, отваривается в течение 30 минут, фильтруется.

Кроме приведенных примеров питательных сред имеется и ряд других. Чаще всего употребляется сусло-агар.

Чисто вымытую и высушенную посуду заворачивают в бумагу, колбы и пробирки затыкают ватно-марлевыми пробками, горлышки обвязывают бумажными колпачками. Стерилизуют посуду в автоклаве 15-20 мин при давлении 1 атм. или в сушильном шкафу при температуре 150°С в течение 2 часов. Затем по одному из вышеописанных рецептов готовят среду. Если в вашем распоряжении имеется универсальная лакмусовая бумага, нелишним будет проверить значение рН среды. В оптимальном случае этот показатель должен равняться 6,0. При наличии отклонений среду подкисляют либо подщелачивают.

Стерилизацию проводят в автоклаве при 1 атм. в течение 15-20 мин. После стерилизации среду слегка охлаждают, разливают в подготовленные пробирки и в чашки Петри. Чтобы при посеве не произошло бактериальное заражение, в среду добавляют антибиотики из расчета 200 ЕД пенициллина, 100 ЕД стрептомицина, 25-50 ЕД тетрациклина на 1 мл среды.

Вышеописанную процедуру можно упростить, приспособив её к домашним условиям. Для этого понадобятся вата, алюминиевая фольга, пробирки с закручивающимися колпачками (пробками), трубка для заполнения пробирок, мерная кружка, кастрюля-скороварка и два литровых сосуда с маленьким горлышком.

Ингредиенты среды смешиваются. Смесь заливается в каждый сосуд, который заполняется на 1/2-3/4 вместимости. Горлышко сосуда затыкается ватой и покрывается сверху алюминиевой фольгой. В качестве домашнего заменителя автоклава используют кастрюлю-скороварку, которую заполняют водой (уровень воды - около 1-2 см), вставляют каркас, призванный удерживать сосуды в вертикальном положении, а затем - сами сосуды. Кастрюлю закрывают крышкой и фиксируют крышку на своем месте. Нагрев ведут до тех пор, пока пар не начнет вырываться из клапана кастрюли. Спустя несколько минут клапан закрывают. Сосуды стерилизуют при температуре около 120°С в течение 15 минут. Нельзя позволять температуре подняться выше 121°С, так как это может вызвать карамелизацию и порчу среды. По истечении 15 минут нагрев прекращают и позволяют давлению в скороварке прийти в норму (это произойдет приблизительно через 45 минут). Тем временем с пробирок удаляют колпачки (если пробирки взять негде, можно вместо них использовать маленькие стеклянные баночки, например, из-под медпрепаратов), помещают пробирки в чистые жестяные банки (их используют для удобства, чтобы можно было одним движением переместить куда-либо сразу все пробирки) и располагают банки и колпачки на чистой рабочей поверхности. В помещении предварительно проводят влажную уборку, удаляя все пылинки. Как только сосуды со средой остынут настолько, что можно взять из скороварки при помощи полотенца или рукавиц, их вынимают и ставят рядом с пробирками. Сосуды встряхивают так, чтобы смесь хорошо перемешалась, убирают фольгу и вату. Пробирки через трубочку заполняют средой на 1/3. Затем пробирки прикрывают колпачками и помещают в жестяные банки. Их ставят в скороварку, температура вновь доводится до 120°С и выдерживается в течение 30 минут. Кастрюле снова дают время остыть, а давлению внутри нее - вернуться в норму.

Пробирки устанавливаются под углом к горизонтальной поверхности таким образом, чтобы обеспечить максимальную площадь поверхности среды для роста мицелия. Когда среда остынет, она превратится в плотное желе, и пробирки могут быть возвращены в вертикальное положение; поверхность среды при этом останется наклоненной под углом.

Если пробирки не используются немедленно, они могут храниться в холодильнике от недели до месяца. Однако в этом случае следует регулярно проверять их на наличие бактериальных или грибковых заражений.

Когда пробирки остынут, приходит время для первого шага, который требует особой осторожности. По возможности работу проводят в максимально свободном от грязи и пыли помещении. Все форточки и двери должны быть закрыты, чтобы исключить всякую вентиляцию воздуха. В помещении следует провести влажную уборку. Для достижения лучших результатов рекомендуется также обработать все его поверхности из распылителя раствором с 10% хлорным отбеливателем (например, «Белизной»).

Культуру грибов можно выделять как из плодовых тел, так и из спор. Для получения споровой культуры в качестве посевного материала используют споровый порошок, взвешенный в воде в виде суспензии. Споровый порошок выделяют из шляпки, приклеенной к крышке пустой стерильной чашки Петри.

В домашних условиях проще выделять культуру из плодового тела. Для её получения пользуются молодыми, неповрежденными плодовыми телами, тщательно очищенными от мусора. Поскольку на поверхности могут находиться бактерии и споры других грибов, используют внутреннюю ткань гриба, как правило, свободную от подобных загрязнений.

Скальпель или тонкий острый нож прокаливают на огне спиртовки. Можно также воспользоваться так называемой инокуляционной петлей. Её можно изготовить из обыкновенной вязальной спицы или стальной проволоки, загнув на 10 мм её конец и сточив его на нет. Гриб аккуратно разламывают на две половинки. Его помещают на стол разломанной поверхностью вверх и из верхней части ножки вырезают кусочки ткани примерно по 0,5 см. Для обеспечения стерильности их окунают в перекись водорода, а затем над пламенем горелки открывают пробирку с питательной средой и помещают на нее кусочек ткани гриба. Во избежание риска заражения всю операцию необходимо проводить настолько быстро, насколько это возможно. Ни пробирка, ни пробка не должны касаться рабочего стола - и то, и другое удерживают в руке. Пробирку необходимо удерживать в горизонтальном положении, чтобы посторонние частицы из воздуха не попадали в горлышко. Кусочек грибной ткани помещается на самый край горлышка. Пробирку закрывают предварительно обожженной над огнем пробкой. Теперь пробирку слегка встряхивают, чтобы поместить частицу гриба на поверхность питательной среды.

Повторите эту процедуру со всеми оставшимися пробирками и грибным материалом несколько раз, так как даже при осторожнейшей технике инокуляции возможно заражение посторонними микроорганизмами. В перерывах между инокуляцией пробирок каждый раз стерилизуйте скальпель или петлю в пламени горелки. Проверьте плотно ли закрыта пробка в пробирке. Обвяжите место её соприкосновения с горлышком медицинским бинтом. Бинт позволит «дышать» мицелию, но предотвратит заражение. Если требуется вырастить сразу несколько культур, то на данном этапе нужно подписать засеянные пробирки, чтобы избежать путаницы в дальнейшем.

И, наконец, пробирки помещают в затемненное место с постоянной температурой 13-22°С. Через несколько дней очертания грибной ткани станут нечеткими - начался рост мицелия, который спустя несколько недель полностью освоит поверхность агара. Если в пробирках замечают плесень (обычно определяется по наличию зеленых, черных или другого цвета спор), их незамедлительно отделяют от остальных, содержимое уничтожают, а пробирку и колпачок тщательно промывают теплой мыльной водой.

Агар в пробирке, содержащий мицелий гриба, является маточной культурой. Маточные культуры хранят при температуре 1-2°С, ежегодно пересевая на свежую питательную среду.

Если нужно размножить или поделиться культурой с другими грибоводами, то её переносят из одной пробирки в несколько. Это делают путем повторения процесса, описанного выше, только вместо кусочка ткани плодового тела гриба следует использовать частичку агара с проросшим мицелием.

Следующим шагом является разведение культуры гриба на промежуточном субстрате.

Для разведения культуры гриба на промежуточном субстрате часто используется зерно. Однако это вовсе не означает, что мицелий, пророщенный на зерне, будет самым лучшим, хотя такое мнение и довольно широко распространено. Мицелий, выращенный на смеси опилок, плодово-ягодного жмыха (особенно с примесью косточковых ягод), компоста и некоторых других компонентов, имеет как минимум несколько неоспоримых преимуществ - большую лёжкость, жизнестойкость и срок хранения. Так, зерновой мицелий можно хранить при температуре 0 - +2°С 2-3 месяца, а компостный - около года, причем температура хранения может быть значительно выше. Причина же широкого распространения зернового мицелия состоит в простоте работы с ним, особенно при массовой организации производства.

Поэтому дальнейшее описание будет посвящено технике получения именно зернового мицелия как наиболее известной, универсальной и отработанной.

Для обеспечения стерильности в момент инокуляции можно использовать микробиологическую лабораторию, общий вид которой показан на рисунке. Домашняя микролаборатория представляет собой герметично закрывающийся ящик с вмонтированным стеклом на верхней крышке, бактерицидной лампой и обычной лампой накаливания, прикрепленными к боковым стенкам, а также рукавами с резинками, расположенными на передней стенке. Имея такую микролабораторию и поддерживая в ней стерильность, можно проводить инокуляцию практически в любом помещении.

Для инокуляции промежуточного субстрата очень удобно использовать 0,33-литровые бутылки (из-под пива, лимонада). Преимущество бутылок в их маленьких горлышках. Это значительно снижает возможность постороннего заражения во время инокуляции. Правда, в дальнейшем это преимущество порождает и основной недостаток: проросший субстрат не так-то легко извлечь обратно. Использование банок с этой точки зрения является более практичным, однако для удачного применения необходимо использовать специальные фильтры.

Материалы, необходимые для процесса: скороварка, алюминиевая фольга, зерно. Под зерном обычно подразумевают семена различных злаковых культур - пшеницы, ржи, проса, сорго, овса, ячменя, кукурузы.

Для приготовления зернового мицелия в бутылках объемом 0,33 л понадобится 1/3 стакана зерна и 1/4 стакана воды. Можно использовать бутылку и другого объема. Надо лишь иметь в виду, что зерно в процессе стерилизации увеличится в объеме приблизительно вдвое. Поэтому бутылку не следует заполнять зерном более чем на 1/3.

Бутылки заполняют зерном и водой, помещают в скороварку и накрывают алюминиевой фольгой. Фольга предотвращает намокание пробки бутылки от конденсата. Зерно готовится при температуре 120°С в течение 7 минут. Когда скороварка немного остынет, бутылки вынимают и встряхивают так, чтобы зерно хорошенько перемешалось.

Затем их снова помещают в скороварку и «варят» в течение 45 минут при температуре 120°С (время, необходимое для разогрева скороварки до этой температуры, не учитывают). Правильно приготовленное зерно должно быть рассыпчатым, легко вытряхиваться. Переваренное зерно, приготовленное с излишком воды, часто разрывается, и крахмал, входящий в его состав, вызывает слипание отдельных зерен. Зерно, приготовленное в малом количестве воды, будет слишком твердым, ссохшимся и не пригодным для роста и развития мицелия.

Для некоторых видов грибов имеет весьма важное значение кислотность субстрата. В этом случае её можно регулировать путем добавления в субстрат известняка, гипса, мела. Шампиньон двуспоровый (Agaricus bisporous) - типичный представитель такого рода грибов. Наиболее оптимальное значение рН должно равняться 6.0.

Одна пробирка с мицелием на агаре используется для инокуляции многих бутылок, так как для каждой из них требуется лишь маленький кусочек мицелия. Вся техника схожа с ранее выполняемыми процедурами. Пробирка открывается одновременно с бутылкой, заполненной зерном, стерильным скальпелем частичка мицелия из пробирки переносится в бутылку. При этом пробирку лучше удерживать в горизонтальном положении во избежание попадания в нее пыли и загрязнений из воздуха. Обе емкости закрываются. Бутылки подписываются с указанием вида гриба и даты инокуляции.

По мере роста мицелия необходимо периодически встряхивать содержимое бутылки, чтобы ускорить процесс прорастания и предотвратить превращение зерна в плотную густую массу. Температуру поддерживают на уровне 20-25°С. После того как гриб полностью колонизирует зерно (субстрат зарастает в белый цвет), бутылки следует хранить в холодильнике при температуре 0-2°С.

Третьей и завершающей стадией культивирования грибов является их разведение на конечном субстрате и плодоношение. Обычно конечный субстрат не является зерновым, а используются компост, солома, древесина и т.д. Выбор субстрата варьируется в зависимости от вида гриба, способа выращивания и является темой для отдельного рассмотрения.

Выше была описана стандартная методика. Но наука не стоит на месте. Периодически появляются сообщения об использовании новых субстратов и новых методик. Заслуживает внимания технология, предложенная на основе многолетних экспериментов Рэнделом Уэйном (Randall R. Wayne). К сожалению, как и всякое другое новшество, данная информация является коммерческой и поэтому не доступна нам в полном объеме. Однако она может подсказать специалистам и любителям соответствующее направление в их экспериментах.

Рэнделом Уэйном за основу были взяты дезинфицирующие способности перекиси. Сначала стандартно готовится среда, дается время агару остыть до температуры, когда его можно свободно взять руками. Мерная пипетка стерилизуется либо выдерживается в кипящей воде в течение минуты, затем охлаждается. На один литр агар-среды добавляется 6-8 мл 3%-ной перекиси. Предварительно убеждаются, что раствор не потерял эффективности. Для этого достаточно добавить в него кусочек банана. Если раствор энергично вспенился, значит, все в порядке. Теперь, по утверждению автора, если после затвердения агара открыть пробирки и оставить их на открытом воздухе хоть на час, на агаре все равно не будут развиваться посторонние микроорганизмы. Уэйн утверждает, что работы по инокуляции субстрата можно проводить на открытом воздухе, стерилизуя лишь скальпель. Особенностью метода является то, что при получении мицелия непосредственно из спор необходимо предварительно вырастить мицелий на обыкновенном агаре, а уж затем смешивать его с агаром, содержащим перекись. При получении мицелия из части плодового тела инокуляцию можно проводить напрямую.

Добавление перекиси водорода предотвращает кислородное голодание развивающейся грибницы, так как в продуктах её разложения содержится кислород. Отличительной чертой перекиси является также и то, что она нейтрализует не только бактериальные заражения (как это делают антибиотики), но и грибковые.

Используя 3%-ную перекись водорода, возможно сведение к минимуму процесса стерилизации промежуточного и конечного субстрата. А это дает, во-первых, экономию времени, а во-вторых, возможность проведения всего цикла выращивания грибов без использования каких-либо специфических условий и приспособлений. Правда, для этого требуется применять специальный состав субстрата. Например, энзимы, содержащиеся в необработанных опилках, быстро разрушают перекись. Для того чтобы снизить степень их воздействия, опилки просушивают при температуре 150°С в течение нескольких часов или стерилизуют под давлением. Сам же Уэйн рекомендует использовать в качестве субстрата чистую газетную бумагу, картон, различные бумажные отходы, а также сено и аналогичные ему компоненты.

Что ж, теперь вы обладаете достаточной информацией, чтобы самим вырастить мицелий. Попробуйте - и у вас обязательно получится. Если же описанный процесс покажется слишком сложным, всегда можно обратиться к специалистам и приобрести уже готовый посадочный материал.

М.Г. Долидович.

Другие статьи на эту тему читайте здесь.

Понравилась ли статья? Оцените содержание материала
Увидеть, как её уже оценили можно тут
посетите наш
форум о грибах